1. Razões para precipitação em frascos de cultura celular: temperatura
A cultura celular refere-se a um método de simulação do ambiente in vivo in vitro, para que as células possam sobreviver, crescer, reproduzir e manter a estrutura e função principais. Os frascos de cultura celular são um tipo de consumível celular comumente usado na cultura celular aderente. Durante a cultura celular, muitas vezes descobrimos que algumas impurezas se acumulam no líquido. Existem muitas razões para isso, e a temperatura também é uma das razões mais comuns.
A precipitação em frascos de cultura celular pode ser contaminação das células. Se a contaminação for excluída, a turbidez no meio de cultura celular é geralmente interpretada como precipitação de elementos metálicos, proteínas e outros componentes do meio. Os precipitados prejudicam principalmente a proliferação celular normal porque absorvem nutrientes e outros componentes necessários do meio através da quelação, alterando assim a composição do meio. Os precipitados são microscopicamente visíveis e podem interferir em experimentos que requerem análise de imagem.
Na cultura celular, a temperatura é um dos principais fatores que causam precipitação. As proteínas plasmáticas de alto peso molecular podem precipitar da solução quando submetidas a mudanças extremas de temperatura; a inativação por calor e os ciclos de congelamento e descongelamento podem promover a degradação e precipitação de proteínas; como os meios líquidos ou reconstituídos são mantidos refrigerados entre os usos, os sais podem precipitar, especialmente 10x ou outras soluções estoque concentradas.
Claro, se ocorrer precipitação no frasco de cultura celular, se for determinado que ela é causada pela temperatura, é necessário prestar atenção ao ambiente de armazenamento e ao método de operação do meio, e evitar congelamentos e descongelamentos repetidos, o que pode reduzir a probabilidade de precipitação.
2. A causa da precipitação no frasco de cultura celular: suplementos metálicos
Íons metálicos como cobre, ferro e zinco são necessários para o crescimento celular e são suplementos importantes para meios livres de soro. A ausência de outros componentes do soro no sistema de cultivo pode levar à precipitação destes metais, criando um ambiente tóxico para as células. Em um ambiente de pH mais alto (geralmente> 8), íons carbonato e hidróxido e íons cobre, íons fosfato e hidróxido e íons de ferro, íons carbonato, fosfato e hidróxido e íons zinco, íons hidróxido e íons magnésio tendem a formar precipitados insolúveis; sob condições oxidantes, o cobre e o zinco têm maior probabilidade de precipitar, que é o que vemos nos frascos de cultura celular.
Então, como podemos evitar a precipitação causada por suplementos metálicos? Podemos adicionar a proteína transferrina de ligação ao ferro ou adicionar tampão para evitar alterações na pressão osmótica. Também podemos adicionar manitol ou piruvato ao meio para ligar a peroxidação. Hidrogênio para minimizar o estresse oxidativo.
Em suma, não entre em pânico quando houver precipitação no frasco de cultura celular. Análises específicas para descobrir o motivo e formular medidas correspondentes podem reduzir bastante a ocorrência de precipitação e garantir o bom crescimento das células.
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