Qual é a concentração de G418 para triagem de células 293T? O que deve ser prestado atenção durante a operação?

1. Princípio de funcionamento da triagem de células 293T do G418
G418 é um antibiótico neomicina que interfere na síntese de proteínas intracelulares, causando assim a morte celular. No entanto, as células com o gene de resistência à neomicina podem produzir proteínas de resistência para resistir à toxicidade do G418. Portanto, num meio de cultura contendo G418, apenas células com o gene de resistência à neomicina podem sobreviver e crescer.

2. Efeito da concentração de G418 nas células 293T
O efeito da concentração de G418 nas células 293T é multifacetado, incluindo crescimento celular, viabilidade celular, morfologia celular e resistência celular. Os efeitos específicos da concentração de G418 nas células 293T manifestam-se principalmente nos seguintes aspectos:
1. Crescimento celular: Em concentrações mais baixas de G418 (como 00,25 mg/ml), as células 293T podem crescer normalmente, a densidade celular aumenta gradualmente e a morfologia permanece boa. Com o aumento da concentração de G418 (como 0 0,5 mg/ml), a taxa de crescimento celular começa a desacelerar e a densidade celular aumenta lentamente. Quando a concentração de G418 atinge 1 mg/ml, algumas células começam a morrer e a densidade celular diminui significativamente. Continuando a aumentar a concentração de G418 (como 2 mg/ml), a morte celular é mais grave e a densidade celular diminui. 2. Viabilidade celular: Quanto maior a concentração de G418, menor a viabilidade celular. Em baixas concentrações de G418 (como 00,25 mg/ml), a viabilidade celular é alta, a morfologia celular está completa e a coloração é uniforme. À medida que a concentração de G418 aumenta, a viabilidade celular diminui gradualmente, a morfologia celular torna-se irregular e a coloração é irregular. Em concentrações elevadas de G418 (como 2 mg/ml), a viabilidade celular é baixa, a morfologia celular é gravemente danificada e a coloração é anormal.
3. Morfologia celular: Quanto maior a concentração de G418, mais irregular é a morfologia celular. Em baixas concentrações de G418, a morfologia celular é roliça, fusiforme ou plana. À medida que a concentração de G418 aumenta, a morfologia celular torna-se irregular, o volume celular diminui e as bordas celulares não são claras. Em altas concentrações de G418, a morfologia celular é gravemente danificada, o corpo celular é extremamente pequeno e as bordas celulares são quebradas.
4. Resistência celular: Quanto maior a concentração de G418, mais forte será a resistência celular. Em baixas concentrações de G418, as células são mais sensíveis ao G418 e estão propensas à morte celular. À medida que a concentração de G418 aumenta, as células desenvolvem gradualmente resistência e a taxa de sobrevivência celular aumenta. Em altas concentrações de G418, a resistência celular atinge seu pico e as células são capazes de resistir à toxicidade de altas concentrações de G418.
Portanto, para células 293T, a concentração de triagem de G418 é geralmente entre 1-2 mg/ml. Esta concentração pode ser ajustada de acordo com os requisitos experimentais. De modo geral, quanto maior a concentração de triagem, melhor será o efeito de triagem, mas também causará certos danos às células. Portanto, ao escolher a concentração de triagem, é necessário pesar a finalidade experimental e a tolerância celular. Na operação real, você pode começar com uma concentração mais baixa, como 0,5 mg/ml, observar o crescimento celular e aumentar gradualmente a concentração até encontrar uma concentração de triagem adequada.